病理组织切片技术作为病理实验室基本方法之一，具有较高的使用价值，也是目前临床外科病理最基本、最常见的形态学检验技术。石蜡包埋制片术是组织切片制作最常用的一种技术，其基本步骤包括取材、固定、脱水、浸蜡、包埋、切片、染色和封片等。其中切片是最重要的环节，常常由于多方面的原因导致制片困难甚至失败。病理组织切片制作的质量将会对病理诊断的准确性产生一定影响。我们积极探求对策，现以“问题-原因-解决方法”的模式阐述如下：

一、切片问题及处理

1. 切片碎裂或不成形

可能原因：

 组织脱水不彻底（酒精、二甲苯步骤不足）；

 石蜡渗透不佳（时间短或温度低）；

 组织本身较硬（如骨、纤维组织）；

 刀片钝或切片角度不当。

解决方法：

优化脱水程序（梯度酒精充分脱水，二甲苯透明彻底）；

延长浸蜡时间（通常2-3次，每次1小时，60℃）；

硬组织需先脱钙或软化（如EDTA脱钙）；

更换锋利刀片，调整切片机角度（通常4-6°）。

2. 切片卷曲或皱褶

可能原因：

 石蜡温度过高或过低；

 切片速度过快；

 组织块边缘未修平。

解决方法：

 调整蜡块温度（与切片室温一致，约20-24℃）；

 缓慢匀速切片，用毛笔轻轻展平；

 修块时保留1-2mm边缘平整区域。

3. 切片厚度不均

 可能原因：

 切片机故障或未固定牢固；

 组织块硬度不均（如含脂肪和纤维混合）；

 石蜡与组织硬度不匹配。

解决方法：

检查切片机螺丝是否拧紧；

混合组织可适当延长固定/脱水时间；

更换高熔点石蜡（如60-62℃）或添加蜂蜡增加硬度。

二、组织问题及处理

1.组织脱片（染色时脱落）

 可能原因：

载玻片未包被（如未涂多聚赖氨酸或APES）；

烤片时间不足或温度过低；

组织富含脂肪或坏死（如肿瘤组织）。

解决方法：

使用防脱载玻片或手工涂胶（多聚赖氨酸）；

烤片条件：60℃，1小时或37℃，过夜；

脂肪组织需延长固定时间（如10%福尔马林固定24小时）。

2.组织空洞或裂隙

可能原因：

组织固定不及时（自溶）；

脱水过程中收缩（酒精浓度梯度骤变）；

富含水分组织（如脑、脂肪）处理不当。

解决方法：

取材后立即固定（组织厚度≤5mm）；

使用缓慢梯度酒精脱水（如70%→80%→95%→100%）；

对脆弱组织减少二甲苯时间，增加石蜡渗透次数。

三、特殊问题处理

1. 脂肪组织切片困难

解决方案：

延长固定时间（24-48小时）；

脱水后增加二甲苯时间（透明彻底）；

冷冻切片辅助（若石蜡切片仍失败）。

2. 钙化组织切不动

解决方案：

先脱钙处理（如10% EDTA溶液浸泡3-7天）；

避免酸性脱钙液（如硝酸）破坏抗原性（影响后续IHC）。

 3. 切片出现刀痕或划痕

解决方法：

更换新刀片或清洁刀座；

检查组织块中是否有硬物（如缝线、钙化灶）。

四、关键步骤注意事项

1. 固定环节：固定是关键环节。如果切片前的任何步骤处理不当，组织就可能受损，甚至无法用于诊断。固定或处理不足的组织，可能难以获得完整的切片。未完全展平或未正确定向包埋的组织，将使切片医生难以切出完整且有代表性的部分用于诊断。建议：

 10%中性福尔马林固定6-48小时（过久易脆）； 

大组织需剖开固定，避免中心自溶。

2. 脱水与透明： 

梯度酒精（70%→80%→95%→100%）每级1-2小时； 

二甲苯透明时间不宜过长（通常2次，每次30分钟），防止组织过脆。

3. 浸蜡与包埋： 

石蜡熔点选择（常规58-60℃，热带地区可选62℃）； 

包埋时组织方向要平整（尤其是小组织）。

4.冷冻块和水合块：大多数组织样品过度脱水，可以从冰水中受益。用蒸馏水覆盖的冰盘可冷却石蜡和组织，使切片术更容易，尤其是在温暖的气候下。不建议将块放在冰箱中，因为石蜡和组织可能会破裂。冷冻块会将假象引入组织切片。具有钙沉积物的组织块在切片前应先将裸露的组织块表面脱钙。

5.工作环境：最好不要在太冷、太热、太潮湿或通风不佳的房间工作。尽管在大多数实验室中都很难找到理想的环境，但应采取措施防止极端温度和气流。

总结

在病理组织切片操作过程中，每一个步骤都应该认真对待、科学处理，否则将会对制片的质量造成一定的影响。要想提高切片的质量水平，除了规范化的操作之外，还要求操作人员高度的责任心，在实际工作中总结经验，认真分析影响切片质量的每一个小因素，才能制作出质量高、比较完美的病理组织切片，从而为科研、教学、病理检验工作提供依据。