细菌培养与鉴定为医学疾病的诊断、治疗以及预防提供了关键依据。通过从临床样本中分离、培养和鉴定细菌，医生能够确定感染的病原体，从而制定精准的治疗方案。

一、细菌培养的基础

1.培养基的选择。①营养需求：选择合适的培养基是实现细菌良好生长的关键，例如血平板富含血液成分，适用于需氧菌和兼性厌氧菌的培养，能够满足其对营养和氧气的需求；而巧克力平板因含有血液加热后的成分，更适合营养菌的生长，如脑膜炎奈瑟菌等。②特殊要求：某些细菌对培养基的成分有特殊需求，例如结核分枝杆菌需要富含脂质和卵黄的培养基（如改良罗氏培养基）才能良好生长；而厌氧菌则需在无氧环境下使用专门的厌氧培养基，如厌氧血平板或厌氧肉汤，以满足其生长需求。

2.样本采集与处理。①无菌操作：样本采集过程中，任何污染都可能影响诊断的准确性。因此采样时必须使用无菌容器和工具，避免样本受到外界微生物的污染。②样本类型：根据感染部位的不同，可采集多种类型的样本。例如血液样本可用于检测败血症等全身性感染；伤口分泌物则可用于局部感染的病原菌检测。

3.培养条件。①温度：一般来说，35~37°C是多种病原菌生长繁殖的最佳温度，但一些特殊细菌如嗜冷菌（如假单胞菌属中的某些菌株）则需在较低温度（如22~28°C）下培养，以满足其生长需求。②气体环境：需氧菌需要在有氧环境中生长，而厌氧菌则在无氧环境中生长更佳。此外还有一些兼性厌氧菌，它们既可以在有氧环境中生长，也能在无氧环境中生存，只是生长速度和代谢方式可能有所不同。

二、细菌鉴定的方法

1.形态学观察。①革兰氏染色：通过结晶紫初染、碘液媒染、酒精脱色和复红复染等步骤，可将细菌分为革兰阳性菌和革兰阴性菌两大类。革兰阳性菌的细胞壁结构厚，含有大量肽聚糖，可保留结晶紫-碘复合物而呈紫色；而革兰阴性菌细胞壁薄，肽聚糖含量少，易被酒精脱色，最终呈现复染剂的红色。②显微镜检查：利用光学显微镜或电子显微镜观察细菌的形态、大小及排列方式。例如链球菌呈链状排列，葡萄球菌呈葡萄串状排列，而杆菌则呈杆状。这些特征有助于初步判断细菌的种类。

2.生化反应测试。①糖发酵试验：通过检测细菌是否能够发酵特定的糖类产酸产气，可对细菌进行初步分类。例如大肠埃希菌可发酵乳糖产酸产气，而伤寒沙门菌则不发酵乳糖。②酶活性测定：如氧化酶试验可用于区分革兰阴性菌中的肠杆菌科细菌（氧化酶阴性）和非发酵菌（氧化酶阳性）；尿素酶试验则可用于鉴定幽门螺杆菌等产尿素酶的细菌。

3.分子生物学技术。①PCR扩增：针对细菌的特定基因片段进行聚合酶链式反应（PCR），可快速、准确地鉴定细菌种类。例如针对16S rRNA基因的PCR扩增可用于细菌的属、种水平鉴定。②基因测序：通过对细菌基因组序列的分析，可实现精确到种甚至株水平的鉴定，这在复杂感染和耐药菌株鉴定中具有重要价值。

三、临床应用与挑战

1.疾病诊断。①感染性疾病：细菌培养与鉴定是确诊感染性疾病的“金标准”，能够明确感染源并指导合理用药。例如在肺炎、脑膜炎等疾病中，通过细菌培养和鉴定可确定病原菌，为精准治疗提供依据。②药敏试验：与细菌培养同步进行的药敏试验可测试细菌对不同抗生素的敏感性，帮助临床选择最有效的治疗药物，减少抗生素滥用和耐药菌的产生。

2.面临的挑战。①耐药性问题：随着抗生素的广泛使用，细菌耐药性日益严重，给细菌培养与鉴定带来了新的挑战。例如多重耐药菌的出现增加了感染治疗的难度，需要更精准的耐药基因检测技术。②快速检测需求：传统培养方法耗时较长，难以满足临床快速诊断的需求。因此，开发快速、准确的检测技术，如快速培养系统、分子诊断技术等，成为当前研究的热点。

总而言之，细菌培养与鉴定作为医学微生物学的核心技术之一，在疾病诊断和治疗中发挥着不可替代的作用。

（成都市第八人民医院）

张旬