30分钟“极限挑战”：术中冷冻切片病理

术中冷冻切片病理即“术中冰冻”，是指在进行手术时，将病人身体某组织部位切下来快速（通常为30分钟）制作出切片进行病理诊断，以明确病变性质，调整手术方式及范围等。术中冷冻切片病理包括术中冷冻切片病理技术及术中冷冻切片病理诊断两个部分。整个过程由病理医师和病理技师协同合作，密不可分，缺一不可。术中冷冻切片病理技术是指病理技术工作人员对手术标本进行快速冷冻制片的过程，包括将组织标本用冷冻切片包埋剂包埋，包埋后在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度，然后进行切片和染色的过程。术中冷冻切片病理诊断是指病理医师对冷冻制片进行判读，做出病理诊断的过程。

当病理标本送达病理科后的“极限挑战”30分钟流程如下：

取材:病理医生根据送检标本具体需求，快速定位，选取最具代表性的组织进行取材；当送检标本为较大组织或切缘组织等，有必要时可取多个冰冻组织块。

包埋：病理技师用OCT包埋剂（聚乙二醇和聚乙烯醇的水溶性混合物）对取材组织标本进行包埋（包埋时要注意有无特殊切面需求），使组织完全被包裹住。OCT起到对组织的支撑作用，便于后续切片。

速冻:病理技师根据具体组织部位要求，将包埋好的组织放入恒冷箱切片机（预先调好所需温度）进行冷冻；脑、肝、淋巴结-10℃至-15℃；甲状腺、脾、肾、肌肉-15℃至-20℃；带脂肪组织-25℃至-30℃。也可将取材组织放入液氮中进行速冻，以防止在缓慢冷冻过程中，组织内水分分析出形成冰晶，造成组织结构的破坏，以提高制片质量，利于后续阅片。

切片:一般病理科都采用的恒冷箱切片法，病理技师对速冻后的组织进行粗修使其切面平整，然后再以适当厚度进行切片，一般切片厚度为5um-10um；并将组织贴片于防脱载玻片上。

固定：用95%酒精快速固定30s~1min。

水洗：自来水清洗数秒。

染色：①最常见的是HE染色法（苏木精-伊红染色法，hematoxylin-eosinstaining)。苏木精染色2min→自来水洗20s→1%盐酸酒精分化20s→自来水洗20s→氨水返蓝30s→自来水洗20s→伊红染色20s~1min→自来水洗10s→梯度酒精脱水（85%乙醇20s→90%乙醇1min→95%乙醇1min→无水乙醇Ⅰ1min→无水乙醇Ⅱ2min）→透明（二甲苯Ⅰ1min→二甲苯Ⅱ2min→二甲苯Ⅲ2min）→中性树脂封片。

②术中免疫组化染色:是根据抗原与抗体间的特异性结合原理和特殊标记技术，对组织内特定抗原或抗体进行定位、定性或定量检测的一门技术。根据具体染色指标的不同，染色流程略有差异。常用的术中免疫组化标记抗体有：广谱细胞角蛋白（CK）、肿瘤增殖抗原（Ki67）、甲状腺转录因子1（TTF-1）、半乳糖凝集素-3（Galectin-3）、间皮瘤相关抗体-1（HBME-1）和细胞角蛋白19（CK19）等。术中免疫组化染色是对术中HE染色的补充，能为病理医生提供更有力的诊断依据。

阅片：病理医师对染色切片进行镜下阅片，判断组织性质，有无肿瘤细胞扩散、浸润、转移，确定手术切缘是否残留有肿瘤组织等。然后做出病理报告。

术中冷冻切片病理对于患者的益处是显而易见的，但它仍然存在一些局限性。

①术中冷冻切片病理用的是新鲜组织，组织内水分易析出形成冰晶而损伤组织，造成制片质量降低，从而影响诊断的准确性。

②遇到一些较大病变组织时，因为冷冻组织取材有限，不能完全观察到组织所有部位，也有导致漏诊的可能。

所以，一些疑难、交界性肿瘤等的判定仍待石蜡制片后才能确定。

整个冷冻切片病理从组织送到病理科到报告结果，共计时不超过30分钟;若同时送达两份标本或紧邻的送达两份或多份标本，则后一份标本的报告时间可以顺延10分钟。在这个过程中每一步都需要病理医师和病理技师做到“精”“准”“快”，才能及时有效地为临床医生提供有效信息，让躺在手术床上的患者得到更快更有效的手术治疗。这是一次30分钟的“极限挑战”，是病理医生和病理技师在通过无数次练习和考核后交出的答卷，是一场与时间的赛跑，也是一场对生命的接力。我们每一位病理医生和病理技师都在自己的岗位上熠熠生辉！